廣西是全國生豬養(yǎng)殖優(yōu)勢區(qū)域，對于近年生豬養(yǎng)殖業(yè)的快速發(fā)展，疫病防控成為影響發(fā)展的重要環(huán)節(jié)。種豬是一般規(guī)模場繁殖育種的核心，種豬主要疫病的免疫好壞是能否做好規(guī)模場豬群疫病整體防控的關鍵。近年，隨著種豬跨省引入日益增多，導致種豬疫病特別是繁殖障礙性疫病不斷發(fā)生，豬瘟(CSF)、豬繁殖與呼吸綜合征(PＲＲS)、豬圓環(huán)病毒2型(PCV－2)感染、豬偽狂犬病(PＲ)成為目前危害種豬群體的主要疫病，并且多發(fā)生隱性感染、混合感染或多重感染，進而在豬場內形成持續(xù)感染源，造成其他豬群疫病不斷發(fā)生。本次調查抽取玉林、貴港、北海三市23個規(guī)模場種豬血清樣品，通過ELISA方法檢測CSFV、PＲＲSV、PCV－2、PＲV等4種病原抗體，了解種豬群體繁殖障礙性疫病的整體免疫狀態(tài)，評估種豬群體感染發(fā)病的風險。
1材料與方法
1.1材料
樣品:從玉林、貴港、北海三市23個中型規(guī)模場共采集723份血清樣品，包括公豬、能繁母豬、后備母豬。
試劑:CSFV抗體檢測試劑盒、PＲVgpI(gE)抗體檢測試劑盒購自美國IDEXX公司;PＲＲSVELISA檢測試劑盒、PCV－2ELISA檢測試劑盒，購自北京金諾百特科技有限公司。
1.2方法
CSFV的檢測步驟:①每個檢測孔和對照孔中加入50μL樣品稀釋液;②50μL的陽性對照和陰性對照分別加入對照孔中;③剩余檢測孔中加入50μL待檢樣品;④覆蓋封板膜后室溫孵育2h;⑥用300μL洗滌液洗板3次，最后一次拍干洗液;⑦每個反應孔加入100μL辣根過氧化物酶標記(HＲPO)的抗CS-FV的酶標抗體，覆蓋封板膜室溫孵育30min;⑧重復步驟⑥;⑨每個反應孔加入100μL底物溶液，避光反應10min后，每孔加入100μL終止液。
PＲＲSV的檢測步驟(PCV－2的檢測步驟相同，僅加入酶結合抗體不同):①將抗原反應板取出，分別加入100μL稀釋后的陽性對照、陰性對照和樣品，覆蓋封板膜后室溫孵育30min;②棄去①中液體，并加入300μL洗滌液，洗滌3次，最后一次拍干洗液;③每個反應孔加入酶結合抗體100μL，室溫孵育30min;④重復步驟②;⑤每個反應孔加入TMB底物溶液100μL，室溫孵育15min;⑥每個反應孔加入50μL終止液。
PＲV的檢測步驟:①將抗原反應板取出，分別加入100μL稀釋后的陽性對照、陰性對照和樣品，覆蓋封板膜后室溫孵育60min;②棄去①中液體，并加入300μL洗滌液，洗滌3次，最后一次拍干洗液;③每個反應孔加入100μL辣根過氧化物酶標記的抗PＲVgpI的酶標抗體，覆蓋封板膜室溫孵育20min;④重復步驟②;⑤每個反應孔加入TMB底物溶液100μL，室溫孵育15min;⑥每個反應孔加入50μL終止液。
結果判定:CSFV、PＲＲSV、PCV－2試驗結果均置酶標儀450nm波長處讀數(shù)，PＲV試驗結果置酶標儀650nm波長處讀數(shù)。其中，CSFV抗體判定標準:阻斷率(%)=(1－樣本A450/陰性對照平均值)×100%，阻斷率≥40%，判為陽性(有抗體存在)，阻斷率≤30%，判為陰性(無抗體存在);PＲＲSV和PCV－2抗體判定標準:S/P=［(樣品值－陰性值)/(陽性值－陰性值)］，S/P值≥0.4，判為陽性，S/P值＜0.3，判為陰性，但此結果不能區(qū)分感染陽性或免疫陽性;PＲV抗體判定標準:S/N=樣本A650/陰性對照平均值，S/N值≤0.60，判為PＲVgpI抗體陽性，S/N值＞0.70，判為PＲVgpI抗體陰性。由于所調查地區(qū)規(guī)模場均使用gpI缺失PＲV疫苗，因此通過此試劑盒檢測，一旦檢出PＲVgpI抗體陽性，則可判定為已受野毒感染。
2結果
檢測結果顯示，CSFV抗體檢測陽性數(shù)為655份，陽性率為90.59%(655/723)。PＲV抗體檢測陽性數(shù)為51份，陽性率為7.05%(51/723)，有8個規(guī)模場檢測到PＲV抗體陽性。有6個規(guī)模場種豬不免疫PＲＲS疫苗，PＲＲSV抗體檢測陽性數(shù)為70份，陽性率為100%(70/70);17個已免疫疫苗的規(guī)模場，PＲＲSV抗體檢測陽性數(shù)為652份，陽性率為99.85%(652/653)。有13個規(guī)模場種豬不免疫PCV－2疫苗，PCV－2抗體檢測陽性數(shù)為169份，陽性率為93.89%(169/180);10個已免疫疫苗的規(guī)模場，PCV－2抗體檢測陽性數(shù)為508份，陽性率為93.55%(508/543)。
3討論
3.1CSFV抗體檢測情況
23個規(guī)模場種豬群免疫抗體陽性率達到90.59%。許多研究表明，當豬群免疫抗體合格率平均達到85%以上時，種群感染或發(fā)生CSF的幾率較小。本次調查結果顯示，所抽查檢測豬群整體免疫情況良好，種群獲得較好的保護力。CSF是廣西地區(qū)流行的主要豬群疫病之一，但流行態(tài)勢已從過去急性發(fā)生，大規(guī)模死亡轉變成病毒在在豬群潛伏感染，溫和散發(fā)流行。因此，當前規(guī)模場在開展種豬CSF防控工作時，在疫苗有效含量，疫苗質量得到保證的前提下，應將工作重心轉移到免疫程序和生物安全措施上，根據(jù)本場特點，掌握母源抗體消長規(guī)律，制定科學合理的免疫程序。對長期免疫抗體低下，經多次檢測免疫抗體仍不達標準，或病原檢測呈陽性的種豬群，應及時淘汰。
3.2PＲＲSV抗體檢測情況
6個規(guī)模場不免疫PＲＲS疫苗，其場內種豬群所抽檢70份樣PＲＲSV抗體陽性率達到100%(70/70)。據(jù)此看出，未免疫種豬群體可能已全部隱性感染PＲＲSV，這十分容易引起該地區(qū)規(guī)模場豬群PＲＲSV的傳播與流行。建議規(guī)模場養(yǎng)殖者應高度重視種豬群體的PＲＲS的防控工作，有條件的主場可以檢測場內存在的流行毒株，選擇合適的毒株疫苗配合種群凈化工作對PＲＲS進行綜合防控。
3.3PCV－2抗體檢測情況
本次調查結果顯示，有13個規(guī)模場種豬不免疫PCV－2疫苗，占56.52%(13/23)，種群抗體陽性率達到93.89%。部分省份和地區(qū)PCV－2血清抗體陽性率達到100%，筆者對廣西10個地級市的發(fā)病豬群使用PCＲ方法進行病原學檢測發(fā)現(xiàn)，全區(qū)PCV－2檢出率達到67.15%，已成為廣西地區(qū)豬群普遍感染病原。PCV－2感染可以一定程度上抑制機體對豬瘟疫苗免疫的應答，成為免疫失敗和誘使豬瘟發(fā)生的原因。規(guī)模場應當制定更嚴格的調運措施，切實做好入場檢疫工作，特別是進一步制定合理的PCV－2免疫程序，認真做好種群疫病凈化工作，降低豬群隱性感染或繼發(fā)感染PCV－2的風險。
3.4PＲV抗體檢測情況
共有8個規(guī)模場檢測出PＲV抗體陽性，占檢測場數(shù)的34.78%(8/23)。結果顯示，所調查規(guī)模場約1/3存在種豬PＲV抗體陽性。本次調查結果gE感染抗體陽性率7.05%，與山西8地市部分規(guī)模場gE感染抗體平均陽性率2.98%相比偏高，與廣東省36個中小規(guī)模豬場種豬gE感染抗體平均陽性率11.67%～23.50%，福建省106個規(guī)模場種豬gE感染抗體平均陽性率12.3%～24.2%相比則偏低，且差異性極顯著(P＜0.001)。這表明廣西地區(qū)種豬的PＲV野毒感染能得到夠較為有效的控制。通過現(xiàn)場調查發(fā)現(xiàn)，規(guī)模場均高度重視PＲ的防控，全群均按程序進行免疫，因此PＲ的防控收到較為良好的效果，但仍有gE感染抗體陽性，原因可能一是種豬群已隱性感染PＲＲSV、PCV－2等免疫抑制性疫病病原，增加了感染野毒的風險;二是由于忽視前期引種工作，入場檢疫不嚴格，引發(fā)PＲV在場內垂直或水平傳播，但由于疫苗的廣泛應用，使感染強度一直維持在較低水平;三是沒有做好PＲ凈化工作，導致陽性種群持續(xù)存在，成為隱性感染源。因此，針對近年PＲV侵襲力持續(xù)漸增的情況，建議對于出現(xiàn)種群gE感染抗體陽性的規(guī)模場，應當對種豬進行血清學或病原學監(jiān)測，對檢測陽性豬堅決淘汰，此后按季度進行篩查，直到全群陰性，并且配合建立良好的飼養(yǎng)管理和生物安全措施，達到全場PＲ凈化。
(廣西動物疫病預防控制中心，甘海霞，鄭敏，溫麗霞，楊榮，陳芳芳，鄭列豐，梁晟，鐘華訓)
